Blau de tiazolil CAS 298-93-1

Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. és un dels fabricants i proveïdors més experimentats de blau de tiazolil cas 298-93-1 a la Xina. Benvingut a l'engròs a granel d'alta qualitat blau de tiazolil cas 298-93-1 a la venda aquí des de la nostra fàbrica. Hi ha un bon servei i un preu raonable.

Blau de tiazolil, més conegut com MTT (bromur de 3-(4,5-dimetiltiazol{-2{-il)-2,5-difeniltetrazoli), conté una dualitat fascinant: és alhora una eina vital en biologia cel·lular i una raresa química camaleònica. Aquesta pols cristal·lina groga pateix una metamorfosi sorprenent a les cèl·lules vives: les reductases mitocondrials escinten el seu anell de tetrazoli, transformant-lo en un precipitat de formazan morat insoluble, una reacció tan sorprenent visualment que s'ha convertit en l'estàndard d'or per mesurar la viabilitat cel·lular. No obstant això, més enllà del banc de laboratori, MTT revela comportaments més esotèrics; la seva estructura cristal·lina forma patrons peculiars de "espina de peix" sota microscòpia, mentre que les seves propietats redox li permeten participar en reaccions fotoquímiques exòtiques quan s'exposa a longituds d'ona específiques de la llum. Curiosament, el compost exhibeix un fenomen rar anomenat "metacromàsia", que apareixen colors diferents segons la concentració i l'entorn molecular, una propietat que abans van aprofitar els químics tèxtils per crear tints "intel·ligents". Estudis recents han descobert el seu paper inesperat com a inhibidor feble de certs enzims de la cadena respiratòria, donant a entendre que aquest reactiu d'assaig omnipresent pot haver estat influint subtilment en els processos metabòlics que els científics l'utilitzen per estudiar. Quan es dissolen en dissolvents orgànics, les solucions MTT mostren un efecte d'extinció de la fluorescència inusual que ha desconcertat els químics físics, cosa que suggereix interaccions intermoleculars complexes que encara esperen una explicació completa.

Blau de tiazolil,El nom químic és 3- (4,5-dimetil-2-tiazol) -2,5-difeniltetrazoli bromur, abreujat com MTT, que és un compost orgànic important. Des que Mosman va informar per primera vegada l'ús de la tinció de MTT per determinar el creixement i la supervivència cel·lular el 1983, MTT s'ha aplicat àmpliament en camps com les ciències de la vida, la investigació mèdica i el desenvolupament de fàrmacs. La següent és una explicació detallada del seu propòsit:

Aplicació a la Recerca en Biologia Cel·lular

 

MTT és un dels mètodes clàssics per determinar la proliferació cel·lular. Durant el cultiu cel·lular, les deshidrogenases com la succinat deshidrogenasa en els mitocondris de cèl·lules vives poden reduir la MTT exògena a formazà cristal·lí blau morat insoluble, que es diposita a la cèl·lula. Les cèl·lules mortes no tenen aquesta capacitat reductora i, per tant, no produeixen formazan. En dissoldre el formazan a les cèl·lules i mesurar el seu valor d'absorció de llum a longituds d'ona específiques (com ara 490 nm o 562 nm) mitjançant un lector d'assaig immunoabsorbent vinculat a enzim-(ELISA), el nombre de cèl·lules vives es pot reflectir indirectament. Dins d'un determinat rang de nombres de cèl·lules, la quantitat de cristalls MTT formats és proporcional al nombre de cèl·lules, de manera que la proliferació cel·lular es pot determinar en funció del valor d'absorbància mesurat (valor OD).

Aplicació a la Recerca en Biologia Cel·lular

 

MTT també es pot utilitzar per determinar la toxicitat de fàrmacs o altres mètodes de tractament (com ara la irradiació per radiació) en cèl·lules cultivades in vitro. En comparar els valors de DO del grup de tractament i del grup control, es pot avaluar l'efecte dels fàrmacs o mètodes de tractament sobre l'activitat cel·lular. Com més gran sigui el valor de DO, més forta serà l'activitat cel·lular; Per contra, indica que com més feble és l'activitat cel·lular o més gran és la toxicitat cel·lular. Aquest mètode té àmplies aplicacions en el cribratge de fàrmacs, la investigació en toxicologia i altres camps. Tot i que la MTT s'utilitza principalment per mesurar la proliferació cel·lular i la citotoxicitat, en alguns casos, també es pot utilitzar per ajudar en l'estudi de l'apoptosi cel·lular. Durant el procés d'apoptosi cel·lular, l'activitat enzimàtica dins de la cèl·lula canvia, cosa que pot afectar la capacitat reductora de MTT. Comparant la diferència de valors de DO entre cèl·lules apoptòtiques i cèl·lules normals, es pot determinar preliminarment l'aparició d'apoptosi cel·lular. Tanmateix, cal tenir en compte que la MTT no és un mètode especialitzat per detectar l'apoptosi cel·lular i els seus resultats s'han d'analitzar de manera exhaustiva juntament amb altres mètodes de detecció d'apoptosi.

Aplicació en el desenvolupament de fàrmacs

 

En el procés de desenvolupament de fàrmacs, l'assaig MTT és un mètode de detecció de fàrmacs d'alt rendiment-comú. Mitjançant la incubació conjunta del fàrmac de prova amb cèl·lules i l'ús de l'assaig MTT per mesurar els canvis en l'activitat cel·lular, les molècules potencials de fàrmacs actius es poden seleccionar ràpidament. Aquest mètode té els avantatges d'una operació fàcil, resultats fiables i alt rendiment, i té un valor d'aplicació important en les primeres fases del desenvolupament de fàrmacs. El test MTT també es pot utilitzar per estudiar el mecanisme d'acció dels fàrmacs. Comparant els canvis en l'activitat cel·lular en diferents condicions de tractament amb fàrmacs, es pot determinar preliminarment l'impacte dels fàrmacs en processos com la proliferació cel·lular i l'apoptosi. Combinant altres tècniques de biologia molecular com ara Western blot i citometria de flux, es poden revelar encara més els objectius i les vies de senyalització dels fàrmacs. En l'avaluació de la seguretat dels fàrmacs, el test MTT es pot utilitzar per avaluar els efectes tòxics dels fàrmacs a les cèl·lules. Mitjançant la mesura dels canvis de valor OD de les cèl·lules després del tractament amb fàrmacs, és possible determinar si el fàrmac té citotoxicitat i la força de la toxicitat. Això és de gran importància per guiar la investigació preclínica i l'aplicació clínica de fàrmacs.

L'aplicació de MTT en altres camps

 

En la investigació immunològica, el test MTT es pot utilitzar per determinar la capacitat de proliferació dels limfòcits. Mitjançant la incubació conjunta de limfòcits amb antígens o immunoestimulants i mesurant els canvis en l'activitat cel·lular mitjançant l'assaig MTT, es pot avaluar la capacitat de resposta immune dels limfòcits. Aquest mètode té àmplies aplicacions en el desenvolupament de vacunes, immunoteràpia i altres camps. En la investigació oncològica, el test MTT es pot utilitzar per determinar l'activitat de proliferació i la sensibilitat als fàrmacs de les cèl·lules tumorals. En comparar els canvis en els valors de DO de les cèl·lules tumorals en diferents condicions de tractament amb fàrmacs, es poden examinar molècules de fàrmacs amb efectes inhibidors sobre les cèl·lules tumorals i es poden avaluar els seus efectes anti-tumorals. Això és de gran importància per guiar el tractament clínic dels tumors. En la investigació de toxicologia ambiental, l'assaig MTT es pot utilitzar per avaluar els efectes tòxics dels contaminants ambientals a les cèl·lules. Mitjançant la co-incubació de cèl·lules amb diferents concentracions de contaminants i mesurant els canvis en l'activitat cel·lular mitjançant l'assaig MTT, es pot determinar la toxicitat i el mecanisme d'acció dels contaminants. Això és de gran importància per avaluar els riscos ecològics dels contaminants ambientals i formular polítiques de protecció del medi ambient. 

Passos experimentals deblau de tiazolilmètode:

1: La tripsina digereix cèl·lules de fase logarítmica, les centrifuga i les recull després de la terminació per fer la suspensió cel·lular i ajusta la seva concentració a 5-10 segons el recompte de cèl·lules × 104/ml. Per als principiants, és necessari que les cèl·lules arribin a 5-10 × 104/ml sovint no sap per on començar. Estic aquí per oferir-vos un mètode senzill per determinar inicialment el nombre de cel·les.

Preneu com a exemple 25 cm2 que s'utilitzen habitualment per al cultiu cel·lular:

1) La densitat cel·lular és d'uns 80% ~ 90% (la figura següent mostra l'estat aproximat de les cèl·lules a un 80% ~ 90% de densitat). Després de la digestió i la centrifugació, traieu el sobrenedant i afegiu 3 ml de medi per barrejar-lo.

2) Agafeu un nou tub de centrífuga estèril de 15 ml (per al següent pas d'inoculació de la placa de 96 pous) i ompliu-lo amb uns 9 ml de mitjà

3) Agafeu 1 ml de la suspensió cel·lular de 3 ml preparada al primer pas, afegiu-lo al tub superior i compteu les cèl·lules després de barrejar-les. En aquest moment, generalment és de 5-10 o menys × 104/ml, que equival a 5-10 cèl·lules per cel·la en 4 cel·les del tauler de recompte de cèl·lules (vegeu la figura següent); Si la concentració no és suficient, s'afegirà la suspensió cel·lular segons el resultat del recompte i cada gota es calcularà com a 50 ul.

4) El nombre de cel·les s'ha d'ajustar segons els diferents propòsits de l'experiment. Per exemple, en l'experiment de proliferació cel·lular general, es poden utilitzar 2000 cèl·lules per pou (equivalent a la densitat de suspensió cel·lular de 2 × 104/ml), de 5000 a 10000 cèl·lules per pou (equivalent a la densitat de suspensió cel·lular de 5 × 104/ml). A més, el nombre de cèl·lules també s'ha de determinar segons les seves pròpies característiques, com ara la velocitat de creixement. Per exemple, la densitat de cèl·lules que creixen més ràpid pot ser lleugerament menor.

2. Després de preparar la suspensió cel·lular, barregeu-la suaument i afegiu 100 ul a cada forat, de manera que la densitat de les cèl·lules a provar sigui de 5000-10000/forat (el forat de la vora s'omple amb PBS estèril).

L Nota: Com que les cèl·lules continuaran instal·lant-se després de la barreja, és necessari barrejar-se repetidament durant el procés d'inoculació, com ara barrejar una vegada cada sis forats, per assegurar-se que la densitat cel·lular de la inoculació sigui exactament la mateixa entre els forats, la qual cosa és crucial per als resultats de MTT.

3. Poseu la placa de cultiu cel·lular inoculada a la incubadora per al cultiu fins que la monocapa cel·lular quedi coberta amb la part inferior del forat (placa plana de 96 forats) i afegiu el fàrmac amb gradient de concentració. En principi, el fàrmac es pot afegir després que la cèl·lula estigui enganxada a la paret, o dues hores, o mig dia, però sovint afegim el fàrmac a la tarda del dia anterior i al matí següent. En general, s'estableixen 5-7 gradients, 100 ul per forat i 3-5 forats múltiples. Es recomana establir 6, en cas contrari és difícil reflectir la situació real. La figura següent es pot utilitzar com a pas de referència per a la placa de 96 forats.

L Per a la dosificació, algunes persones afegeixen directament medicaments a plaques de 96 pous en diferents volums per formar un gradient de concentració. Però crec que hauríem d'intentar barrejar diferents concentracions de fàrmacs al tub EP, després treure el sobrenedant de cultiu de la placa de 96 pous (que es pot aspirar amb una pistola de descàrrega) i afegir 100 ul de medi de cultiu que conté diferents concentracions de fàrmacs, que poden garantir la precisió de la concentració del fàrmac. A més, cal tenir en compte que si s'utilitza aquest mètode, no xucleu tota la solució de cultiu de plaques de 96 pous abans d'afegir medicament. Hauríeu d'afegir mostres immediatament després de succionar-ne una part per evitar la mort cel·lular a causa de l'assecat de la placa de 96 pous.

Incubeu amb un 4,5% de CO2 a 37 graus durant 16-48 hores i observeu l'efecte del fàrmac al microscopi invertit. La figura següent mostra un gradient típic de citotoxicitat de fàrmacs.

4. Afegiu 10 ul de solució MTT (5 mg/ml, és a dir, . 0.5% MTT) a cada pou i continueu cultivant durant 4 h. Si el fàrmac pot reaccionar ambblau de tiazolilla solució de cultiu es pot descartar després de la centrifugació i la solució de cultiu que conté MTT es pot afegir després de rentar-se amb PBS 2-3 vegades.

5. Aturar el cultiu i preparar-se per a la dissolució i la cristal·lització.

Blau de tiazolil, el nom xinès del qual és el blau de metil, és un important compost orgànic que s'utilitza àmpliament en medicina, biologia i química. en medicina, sovint s'utilitza per tractar la intoxicació per nitrits, la intoxicació per cianur, etc., i també s'utilitza en el diagnòstic i el tractament adjuvant d'algunes malalties; en la investigació biològica, es pot utilitzar com a agent de tinció per etiquetar cèl·lules o teixits. Tanmateix, com molts fàrmacs, el blau de metilè també pot tenir una sèrie d'efectes secundaris durant l'ús:

Efectes secundaris del sistema digestiu

Les nàusees i els vòmits són un dels efectes secundaris comuns del sistema digestiu del blau de metilè. Quan el blau de metilè entra al cos, pot estimular la mucosa gastrointestinal, provocant nàusees i fins i tot vòmits en casos greus. Aquest símptoma és més pronunciat quan la velocitat d'injecció intravenosa és massa ràpida o la dosi és massa gran. Per exemple, en alguns casos clínics, els pacients poden experimentar nàusees i vòmits importants poc després de la injecció intravenosa ràpida de blau de metilè, cosa que afecta la seva comoditat i experiència de tractament. Alguns pacients poden experimentar dolor abdominal després d'utilitzar blau de metilè, i el grau de dolor pot variar en funció de les diferències individuals, que van des de molèsties lleus fins a dolors més intensos.

Al mateix temps, també pot anar acompanyat de diarrea, que pot ser deguda a la interferència del blau de metilè en el peristaltisme intestinal i la funció digestiva, provocant un moviment intestinal anormal i canvis en la secreció del líquid digestiu. L'aparició freqüent o a llarg termini de dolor abdominal i diarrea no només afecta l'absorció de nutrients del pacient i també pot provocar altres complicacions en la salut física.

Efectes secundaris del sistema urinari

Després d'utilitzar el blau de metilè, el color de l'orina es tornarà blau, causat per l'excreció de blau de metilè i els seus metabòlits a l'orina a través dels ronyons. En general, aquest canvi de color de l'orina és temporal i no afectarà greument la salut física. Però en alguns casos especials, com ara pacients amb malalties del sistema urinari, els canvis en el color de l'orina poden interferir amb el diagnòstic de la malaltia i els metges han de realitzar una anàlisi exhaustiva basada en altres indicadors d'examen. Durant la micció, alguns pacients poden sentir una sensació de picor a l'obertura uretral.

 

Això pot ser degut a l'efecte estimulant del blau de metilè a la mucosa uretral, especialment quan la concentració d'orina és alta o la mucosa uretral es frega durant la micció, la sensació de picor serà més pronunciada. Aquest símptoma pot causar certes molèsties als pacients i afectar la seva vida diària.

Efectes secundaris neurològics

Els marejos i el mal de cap són efectes secundaris neurològics comuns del blau de metilè. Després d'utilitzar blau de metilè, els pacients poden sentir-se marejats i desorientats al cap, o experimentar molèsties com ara inflor i dolor al cap. Aquest símptoma pot afectar l'atenció i la capacitat de pensament del pacient, i reduir l'eficiència laboral i de vida. L'aparició de marejos i mal de cap pot estar relacionada amb els efectes del blau de metilè sobre els vasos sanguinis i els nervis del cervell, i el mecanisme específic encara necessita més investigació. En casos rars, el blau de metilè pot provocar trastorns de la consciència com ara somnolència, coma, etc.

Això sol ser degut a l'ús excessiu de blau de metilè o als pacients que són massa sensibles al fàrmac, provocant una inhibició severa del sistema nerviós central. Els trastorns de la consciència són un efecte secundari greu que pot posar en perill la seguretat de la vida del pacient i requereixen un tractament de rescat immediat.

1. Quin és l'ús del bromur de tetrazoli blau de tiazolil?

El blau de tiazolil blau de tetrazoli (MTT) es pot utilitzar per mesurar la proliferació cel·lular. MTT produeix una solució groguenca que es converteix en formazà MTT insoluble en aigua de color blau fosc-per les deshidrogenases mitocondrials de cèl·lules vives.

2. És segur emmagatzemar el blau de tiazolil?

Condicions de temperatura: segellar la pols i emmagatzemar-la a la nevera a -20 graus per a la conservació de la congelació, cosa que pot allargar de manera efectiva la vida útil (normalment d'1 a 2 anys); per a l'emmagatzematge a curt termini (dins d'1 mes), es pot mantenir temporalment en condicions de refrigeració de 4 graus.

Requisits a prova de llum-i a prova d'humitat-: la pols MTT és sensible-a la llum i s'ha d'emmagatzemar en ampolles de reactius marrons o ampolles transparents embolicades amb paper d'alumini. Mentrestant, s'han d'afegir agents assecants (per exemple, gel de sílice) per evitar que la pols absorbeixi la humitat i l'aglomeració.

3.Canviarà el color blau de tiazolil?

Quan la solució presenta un precipitat blau morat o s'enfosqueix de color, indica que s'ha oxidat i no es pot continuar utilitzant.
Eviteu col·locar la solució a temperatura ambient o en un ambient lleuger, ja que pot fallar ràpidament.

Etiquetes populars: blau de tiazolil cas 298-93-1, proveïdors, fabricants, fàbrica, venda a l'engròs, compra, preu, a granel, a la venda