Retatrutida(enllaç:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) és un agonista polipeptídic GLP-1R/GIPR/GCGR d'acció llarga sintetitzat químicament, destinat al tractament de la diabetis tipus 2 en adults, el control del pes i el fetge gras no alcohòlic/esteatohepatitis no alcohòlica. La indicació per a la diabetis tipus 2 d'adults d'aquest producte s'ha aprovat per a ús clínic el 29 d'agost de 2023. A més, la sol·licitud de registre clínic d'indicacions de fetge gras no alcohòlic/esteatohepatitis no alcohòlica es troba en l'etapa de revisió final. Hi ha vuit agonistes GLP-1R/GIPR/GCGR en desenvolupament al món, dels quals, Retatrutide de Rita ha fet el progrés més ràpid i va llançar la tercera fase d'assaig clínic el juny d'aquest any. El mateix mes, Rita va anunciar que les dades de recerca de la segona fase de retatrutida es van publicar a la reunió anual de l'ADA, mostrant que a les 24 setmanes, la retatrutida (1 mg, 4 mg, 8 mg o 12 mg) va assolir el punt final principal d'eficàcia. avaluació per a participants obesos o amb sobrepès sense diabetis, amb una pèrdua de pes mitjana del 17,5%. Entre els objectius secundaris, es va aconseguir una pèrdua de pes mitjana del 24,2% al final de les 48 setmanes de tractament. També hem sintetitzat el pèptid al laboratori a partir del mètode publicat. Es descriurà breument el mètode de síntesi específic i els passos específics se'ns poden enviar per correu electrònic.
Mètode 1:
Els passos detallats per sintetitzar Retarutide mitjançant la síntesi en estat sòlid al laboratori són els següents:
Prepareu els reactius i els instruments necessaris: inclosos aminoàcids, diclorometà, carbonat de potassi, gel de sílice etoxilat, acetonitril, piridina, N-metilmorfolina, font de clorur de diisopropiletil, àcid trifluoroacètic, DIPEA, aminoàcids protegits amb Boc i altres reactius, així com agitadors magnètics. , evaporadors rotatius i altres instruments.
(1) Síntesi d'aminoàcids protegits amb Boc: dissol els aminoàcids necessaris en diclorometà, afegiu carbonat de potassi en pols, remeneu uniformement, afegiu gel de sílice etoxilat, continueu remenant i, a continuació, afegiu piridina i N-metilmorfolina per obtenir aminoàcids protegits amb Boc.
(2) Síntesi en fase sòlida: barregeu l'acetonitril, la font de clorur de diisopropiletil i l'àcid trifluoroacètic, remeneu uniformement, afegiu aminoàcids preparats protegits amb Boc i continueu remenant per obtenir el producte de síntesi en fase sòlida.
(3) Grup de desprotecció: dissol la síntesi en fase sòlida en diclorometà, afegiu àcid trifluoroacètic, remeneu-ho uniformement i, a continuació, afegiu DIPEA. Continueu remenant per obtenir la síntesi en fase sòlida desprotegida.
(4) Purificació: dissol la síntesi de la fase sòlida desprotegida en aigua, ajusteu el pH al voltant de 9.0 amb una solució d'hidròxid de sodi, després ajusteu el pH al voltant de 5.0 amb àcid acètic i, finalment, precipitar el producte pur amb èter.
Mètode 2:
Els passos detallats per sintetitzar Retarutide mitjançant síntesi en fase líquida al laboratori són els següents:
Prepareu els reactius i els instruments necessaris: incloent arginina, glicina, anhídrid acètic, trietilamina, carbonat de potassi, diclorometà, metanol, piridina, N-metilmorfolina, anhídrid acètic, acetat de sodi i altres reactius, així com instruments com agitadors, embuts de separació, etc. bombes de buit, forns i columnes cromatogràfiques.
(1) Dissoleu l'arginina i la glicina en una quantitat adequada de diclorometà, afegiu una quantitat adequada d'anhídrid acètic i trietilamina i remeneu uniformement sota un agitador.
(2) Transferiu la mescla dissolta a un forn i escalfeu-la a 80 graus C durant 1 hora per acetilar els residus d'aminoàcids.
(3) Neutralitzeu la solució reaccionada amb pols de carbonat de potassi per neutralitzar l'àcid acètic a la solució per generar acetat de sodi i, a continuació, extreu el pèptid generat amb diclorometà.
(4) Rentar la solució de pèptid extreta amb metanol i filtrar amb una bomba de buit per obtenir el pèptid brut.
(5) Dissoleu el pèptid brut en una quantitat adequada de piridina i N-metilmorfolina, afegiu una quantitat adequada d'anhídrid acètic i acetat de sodi i remeneu uniformement sota un agitador.
(5) Filtrar la solució reaccionada amb una bomba de buit, rentar el pastís de filtre amb metanol i després filtrar amb una bomba de buit per obtenir el Restarutide final.
Mètode 3:
Els passos detallats per sintetitzar Retarutide mitjançant mètodes químics al laboratori són els següents:
Prepareu els reactius i els instruments necessaris: incloent arginina, glicina, anhídrid acètic, trietilamina, carbonat de potassi, diclorometà, metanol, piridina, N-metilmorfolina, anhídrid acètic, acetat de sodi i altres reactius, així com instruments com agitadors, embuts de separació, etc. bombes de buit, forns i columnes cromatogràfiques.
(1) Dissoleu l'arginina i la glicina en una quantitat adequada de diclorometà, afegiu una quantitat adequada d'anhídrid acètic i trietilamina i remeneu uniformement sota un agitador.
(2) Transferiu la mescla dissolta a un forn i escalfeu-la a 80 graus C durant 1 hora per acetilar els residus d'aminoàcids.
(3) Neutralitzeu la solució reaccionada amb pols de carbonat de potassi per neutralitzar l'àcid acètic a la solució per generar acetat de sodi i, a continuació, extreu el pèptid generat amb diclorometà.
(4) Rentar la solució de pèptid extreta amb metanol i filtrar amb una bomba de buit per obtenir el pèptid brut.
(5) Dissoleu el pèptid brut en una quantitat adequada de piridina i N-metilmorfolina, afegiu una quantitat adequada d'anhídrid acètic i acetat de sodi i remeneu uniformement sota un agitador.
(6) Filtrar la solució reaccionada amb una bomba de buit, rentar el pastís de filtre amb metanol i després filtrar amb una bomba de buit per obtenir el Restarutide final.
Es requereixen múltiples reaccions de síntesi orgànica per obtenir la molècula diana. A més, aquest mètode utilitza múltiples reactius orgànics i condicions de funcionament complexes, de manera que la síntesi química de Rotarutide al laboratori no sol ser adequada per a la producció a gran escala o aplicacions industrials. Per a la producció a gran escala o aplicacions industrials, el mètode més utilitzat és preparar Rotarutide mitjançant mètodes de síntesi com la biosíntesi o la síntesi en fase líquida, que són relativament petits a escala de laboratori, relativament senzills en funcionament i adequats per preparar petites quantitats de productes. . La Retarutida obtinguda per aquests mètodes és similar o similar en estructura i activitat biològica a la Retarutida sintetitzada per mètodes químics, però té els avantatges d'un major rendiment i una preparació més fàcil. Al mateix temps, també tenen un millor potencial d'industrialització i perspectives d'aplicació més àmplies.
Mètode 4:
Els passos detallats per sintetitzar Retarutide mitjançant mètodes biològics al laboratori són els següents:
Preparació dels gens i reactius necessaris: Obtenir plasmidis que contenen el gen Retatrutide de la genoteca, transformar els plasmidis amb cèl·lules receptores (com Escherichia coli) i obtenir bacteris d'enginyeria que contenen el gen Retatrutide.
(1) Cultiu de bacteris d'enginyeria: en condicions adequades de temperatura, pH i concentració d'ions, utilitzeu un medi de cultiu per conrear bacteris d'enginyeria, cosa que els permeti proliferar en grans quantitats.
(2) Extracció de Retarutide: els bacteris d'enginyeria cultivats es trituren amb una trituradora i els fragments de cèl·lules es separen de Retarutide mitjançant mètodes com ara ultrafiltració i sedimentació per obtenir el producte cru.
(3) Purificació de Retarutide: el Retarutide brut es purifica mitjançant tecnologia de cromatografia per obtenir Retarutide d'alta puresa.
Detecció i identificació de Rotarutide: Utilitzeu cromatografia líquida d'alt rendiment, espectrometria de masses, ressonància magnètica nuclear i altres tècniques per detectar i identificar l'estructura de la Rotarutide purificada.
L'equació de reacció química per a la síntesi biològica de Retarutide al laboratori implica principalment les reaccions químiques durant el procés d'expressió gènica, que inclouen dos passos: transcripció i traducció.
Transcripció: l'ADN de doble cadena s'obre, utilitzant una cadena com a plantilla per sintetitzar cadenes d'ARN, la qual cosa requereix la implicació de l'ARN polimerasa. L'equació de la reacció és la següent:
ADN de doble cadena: DNApol → ARNm+DNApol
Traducció: Els ribosomes s'uneixen a l'ARNm per sintetitzar cadenes peptídiques, un procés que requereix la participació d'aminoàcids i energia. L'equació de la reacció és la següent:
Ribosoma+ARNm → Cadena peptídica+GDP+Pi+H2O
Cadena peptídica+ATP → Cadena peptídica+AMP+PPi
Entre ells, DNApol representa l'ADN polimerasa; MRNA representa ARN missatger; Els ribosomes representen ribosomes; Les cadenes peptídiques representen cadenes polipeptídiques; El PIB representa el difosfat de guanosina; Pi representa l'àcid fosfòric inorgànic; H2O representa aigua; L'ATP representa el trifosfat d'adenosina; AMP representa monofosfat d'adenosina; PPi representa pirofosfat inorgànic. Aquestes reaccions generen les cadenes peptídiques necessàries per a la síntesi de Retarutida, que després són processades i modificades en les etapes posteriors per obtenir Retarutida.
Els anteriors són mètodes comuns per a la síntesi de Rotarutide al laboratori, cadascun amb diferents avantatges, desavantatges i àmbit d'ús. El laboratori sol utilitzar mètodes de síntesi en fase líquida i síntesi en fase sòlida per a la producció a petita escala per a la investigació i l'ús experimental; La producció industrial, d'altra banda, adopta una combinació de biosíntesi i producció en fase líquida/sòlida per a la producció a gran escala per satisfer la demanda del mercat. Cal tenir en compte que aquests mètodes requereixen una optimització estricta de les condicions i un control del procés per garantir la qualitat i la puresa del producte final.