Sephadex G75és una mena de farciment de filtres de gel amb un bon rendiment. Es prepara mitjançant la reticulació de dextran i epichlorohidrina. És un gel en forma de perla amb una gran quantitat de grups hidroxil, que és fàcil d'inflar en solucions d'aigua i electròlits. El límit d’exclusió màxim d’aquest compost és de 80000 i el grau d’inflor específic depèn de la quantitat de resina i condicions de funcionament seca. Per exemple, en determinades condicions, el grau d’inflor de resina seca pot ser de 519ml/g. Quan el rang de pH de funcionament és de 6.210 (5.210 per a alguns productes), el compost pot romandre estable. Es recomana emmagatzemar -lo a temperatura ambient, fresc i allunyat de la llum en un rang de temperatura de 430 graus (o 425 graus) per mantenir el seu rendiment i estabilitat. Aquesta substància és particularment adequada per a grans biomolècules amb un pes molecular superior a 80000. S'utilitza principalment per a la dessalinització i la substitució tampó de biomolècules tan grans. Mitjançant una operació de pas -, és possible dessalinar, eliminar els contaminants i transferir molècules a una nova solució tampó. A més de la dessalinització i la substitució del buffer, Sephadex G-75 també és adequat per al procés de purificació de grans biomolècules.
 |
 |
Sephadex G75és un gel dextran, que s’utilitza principalment per a la tecnologia de separació i purificació en bioquímica i biologia molecular. Els principals usos d'aquesta substància són els següents:
En el procés de dessalinització, pot eliminar de manera efectiva les sals (normalment sals inorgàniques de molècules petites) de solucions moleculars biològiques. L’avantatge d’aquesta substància és que és fàcil d’operar, ràpid i pot aconseguir una dessalinització efectiva sense alterar l’activitat de les biomolècules. A més, a causa de la seva excel·lent estabilitat química i biocompatibilitat, és adequat per al tractament de la dessalinització de diverses biomolècules, incloses proteïnes, pèptids, àcids nucleics, etc. En aplicacions pràctiques, la dessalització de gel es combina generalment amb altres tecnologies de purificació com ara l’intercanvi d’ions, la cromatografia d’afinitat, etc., per aconseguir una purificació i separació integrals de biomolècules.
Aquesta substància té una àmplia gamma d’aplicacions en la substitució de buffer, especialment en els camps de la bioquímica i la biologia molecular. Per exemple, en el procés de purificació de proteïnes, de vegades és necessari transferir proteïnes d’un sistema tampó a un altre sistema tampó més adequat per a la seva estabilitat i activitat. I aquesta substància pot assolir eficaçment aquest objectiu; En el procés d’extracció d’àcids nucleics, també és necessari separar l’àcid nucleic de la solució que conté impureses i sals, i transferir -lo a un nou tampó per a operacions posteriors. També s’aplica a aquest escenari; Durant el cultiu cel·lular, de vegades és necessari substituir el medi o el tampó de cultiu per mantenir el creixement i l’activitat cel·lulars. Es pot utilitzar per eliminar substàncies nocives dels mitjans de cultiu antics o els buffers i introduir nous mitjans de cultura o buffers.
Seeding molecular
En els processos de recerca i preparació de proteïnes, normalment és necessari separar les proteïnes diana de barreges complexes. Pot separar les proteïnes en funció de la seva mida, aconseguint així la purificació de proteïnes. Ajustant les condicions d’elució, com la resistència iònica i el valor de pH de l’eluent, es pot optimitzar més l’eficiència de separació de les proteïnes. A més de proteïnes i àcids nucleics, també es pot utilitzar per a la separació i purificació d’altres biomolècules, com ara polisacàrids, enzims, anticossos, etc. La velocitat de moviment d’aquestes biomacromolècules en gel depèn de la seva mida i forma, per aconseguir una separació efectiva. Tot i que aquesta substància no s’utilitza directament com a eina per a la determinació del pes molecular, pot servir d’eina auxiliar en la determinació del pes molecular.
En el procés de purificació de proteïnes, normalment és necessari eliminar les impureses de molècules petites com ara sals, metabòlits de molècules petites, lligands no vinculats, etc. de la solució proteica. Aquesta substància pot eliminar eficaçment aquestes petites impureses de molècules de solucions proteiques, millorant així la puresa de les proteïnes. El seu efecte tamís molecular permet eliminar eficaçment aquestes petites impureses de molècules, donant lloc a àcids nucleics més pur. Les preparacions dels enzims contenen normalment impureses de molècules petites com ara substrats no reaccionats, inhibidors, metabòlits, etc. Aquestes impureses poden afectar l’activitat i l’estabilitat dels enzims. Mitjançant la filtració de gel del material, es poden eliminar eficaçment aquestes petites impureses moleculars i es pot millorar la puresa de la preparació de l’enzim. A més de proteïnes i àcids nucleics,
Simular la transducció del senyal intercel·lular
La transducció del senyal intercel·lular és el mecanisme regulador bàsic de les activitats de la vida, que inclou processos complexos com el reconeixement de cèl·lules, la conversió del senyal i la resposta fisiològica. La investigació tradicional sovint es basa en models de cèl·lules vives, però hi ha limitacions com ara xarxes de senyal complexes i múltiples factors interferents.Sephadex G75és un mitjà clàssic de filtració de gel dextran. La seva estructura porosa i l'efecte tamís molecular proporcionen un model físic únic per simular la transducció del senyal intercel·lular.
Un model físic per simular la transducció del senyal intercel·lular mitjançant Sephadex G-75
Simulació de juntes intercel·lulars
La unió de bret<1500 Da. The pore size range of Sephadex G-75 (40-300 μ m) is much larger than that of intercellular junctions (about 1.5 nm), but its porous structure can simulate molecular diffusion processes in local microenvironments. For example:
Formació de gradients de molècules de senyal: es carreguen diferents concentracions de molècules de senyal (com CAMP, CA ²+) a la columna de gel. La diferència de la taxa de difusió de les molècules petites al porus de gel es pot observar mitjançant l'efecte del tamís molecular i es pot simular la transmissió de gradient de senyals químics entre cèl·lules.
Simulació de resposta sinèrgica: dues molècules que interaccionen (com el lligand i el receptor) es carreguen als dos extrems de la columna de gel respectivament, i la seva cinètica d’unió s’analitza mitjançant la diferència de temps d’elució per simular el procés de reconeixement molecular en la comunicació de contacte directe entre cèl·lules.
Simulació del contacte molecular a la superfície de la membrana
La comunicació entre les molècules de superfície de la membrana es basa en les interaccions específiques de les proteïnes superficials de la membrana cel·lular. Sephadex G-75 pot simular aquest procés mitjançant la modificació funcional:
Experiment d’unió del lligand del receptor: Les proteïnes del receptor biotinilat (com EGFR) es fixen a la superfície de les partícules de gel, els lligands marcats fluorescents (com EGF) es capturen a través del sistema de biotina estreptavidina i la intensitat del senyal d’unió es controla amb un detector de fluorescència per quantificar l’afinitat del ligand del receptor.
Anàlisi de la unió competitiva: precarregueu el complex de lligands del receptor a la columna GEL, afegiu inhibidors competitius de diferents concentracions (com els anticossos anti -EGFR), calculeu la constant d’inhibició (KI) a través del canvi de pic d’elució i simuleu l’efecte d’intervenció dels fàrmacs sobre les vies del senyal cel·lular.
Simulació de la transmissió del senyal químic
La transducció del senyal químic es basa en la difusió de molècules de senyalització química (com les hormones i les citocines) segregades per les cèl·lules a través de líquids corporals o matriu extracel·lular a les cèl·lules. Sephadex G - 75 pot construir un model de difusió tridimensional:
Simulació del sistema paracrí: Les cèl·lules secretores (com els macròfags) i les cèl·lules diana (com les cèl·lules T) són respectivament encapsulades en microsfores en gel i es observen l’estat d’activació de les cèl·lules diana (com l’expressió CD69) mitjançant el cultiu de CO per simular l’efecte local dels senyals paracrines.
Transmissió del senyal endocrí: les hormones marcades fluorescents (com la insulina) es carreguen a la columna de gel i es analitza la seva interacció amb els porus en gel a través del temps d’elució i la meitat - vida d’hormones en la circulació sanguínia i la distribució d’òrgans objectiu es preveu combinant models matemàtics.
Cas d'aplicació de Sephadex G-75 en investigació de senyalització cel·lular
Investigació sobre la transducció del senyal de cèl·lules de sang vermella i la funció d'integrina
La integrina d’adhesió de plaquetes IIB 3 és la glicoproteïna més abundant a la superfície de la membrana plaquetària i és crucial per a l’hemostàsia i la formació de trombes. Estudieu l’ús de Sephadex G-75 per simular la interacció entre les plaquetes i el col·lagen subendotelial:
Model d’activació d’integrina: la integrina purificada IIB 3 es va fixar a la superfície de les partícules de gel i es va afegir fibrinogen soluble (FG) com a lligand. La cinètica d’unió es va detectar mitjançant ressonància plasmàtica superficial (SPR). Es va trobar que l'afinitat de la integrina a la FG després de l'activació es va millorar significativament (es va reduir KD de μ m a NM).
Cribratge de fàrmacs antiplaquetaris: complex de fg integrina prèvia a la columna en gel, afegeix fàrmacs antiplaquetaris de diferents concentracions (com Tirofiban), calculen la taxa d’inhibició dels fàrmacs en l’activitat de la integrina mitjançant un desplaçament de pic d’elució i proporciona una alta plataforma de cribratge de {0- per al desenvolupament de nous medicaments antitrombòtics.
Regulació de vies de senyalització relacionades amb el tumor
Les cèl·lules tumorals promouen la proliferació i la metàstasi mitjançant l’activació anormal de vies de senyalització com MAPK i PI3K/AKT. Sephadex G-75 es pot utilitzar per aïllar i purificar les proteïnes clau en les vies de senyalització:
Investigació de la via del senyal EGFR: la proteïna EGFR es va purificar mitjançant filtració de gel Sephadex G-75 i es va analitzar el seu estat de fosforilació mitjançant espectrometria de masses. Es va trobar que el nivell de fosforilació de llocs de Y1068 i Y1086 de EGFR va augmentar significativament després de l'estimulació EGF, que va activar els senyals ERK1/2 i AKT.
Anàlisi del mecanisme de resistència al fàrmac: en el fàrmac - cèl·lules canceroses gàstriques resistents (SGC7901/VCR), es va aïllar i es va purificar la proteïna UHRF1 per Sephadex G-75 i es va trobar que la seva sobreexpressió pot inhibir l’activació de les proteïnes relacionades amb l’apoptosi (com la caspasa-3), reduir la sensibilitat a la quimioteràpia (IC ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ ₅ vegades).
Senyalització de cèl·lules immunes i regulació de polisacàrids
Els polisacàrids d’algues vermelles (BFP) milloren la resposta immune activant les vies de senyalització NF - κ B i MAPK en macròfags. Investigació sobre la separació i purificació de BFP i els seus components (F1, F2, F3) mitjançant Sephadex G-75:
Polysaccharide component analysis: BFP, F1, F2 and F3 with purity>El 95% es va obtenir mitjançant la filtració de gel Sephadex G-75 combinada amb la cromatografia de l’intercanvi de cel·lulosa de DEAE 52 i els seus pesos moleculars eren de 120 kDa, 85 kDa, 60 kDa i 45 kDa, respectivament.
Activació de la ruta del senyal: en el model de macròfags RAW264.7, BFP i els seus components poden induir significativament la secreció de NO i TNF {{1}, i el seu mecanisme implica NF - κ B Nuclear i fosforilació de Jnk, Erk i P38 MAPK. Els components purificats separats per Sephadex G - 75 van demostrar que la F1 tenia l'efecte d'activació més fort sobre les vies NF - κ B i MAPK (augmentant la producció de NO per 2,5 vegades i la secreció de TNF per tres vegades).
Etiquetes populars: Sephadex G75 CAS 37224-29-6, proveïdors, fabricants, fàbrica, a l'engròs, compra, preu, a granel, a la venda