Liraglutide Powder CAS 204656-20-2

Pols de liraglutide, Fórmula molecular C172H265N43O51, CAS 204656-20-2, pes molecular 1209,40. És un glucagon humà acilitzat sintetitzat artificialment com el pèptid-1 (GLP-1) amb més del 97% de similitud de seqüència en comparació amb el GLP-1 natural. Es pot dissoldre en aigua, etanol i propilenglicol. La 34a posició de la lisina de la molècula GLP-1 natural es substitueix per l’arginina, que no només conserva i allarga el temps d’unió entre els productes d’acilació i les proteïnes, sinó que també supera significativament l’inconvenient de la fàcil degradació de GLP. En condicions normals d’emmagatzematge, presenta una bona estabilitat i la seva solució aquosa pot mantenir l’estabilitat física i química durant almenys 2 anys.

Toxicitat genètica: els resultats de la prova AMES per aPols de liraglutide, el test d’aberració cromosòmica per als limfòcits de sang perifèrica humana i la prova de micronucleus de rata van ser negatius.

Toxicitat reproductiva:

1. Les rates masculines es van injectar per via subcutània amb 0,1, 0,25 i 1,0 mg/kg/d de liraglutide 4 setmanes abans de l’aparellament i durant l’aparellament. A una dosi d’1,0 mg/kg/d, la fertilitat dels animals masculins no es va veure directament afectada. Segons els càlculs de l'AUC plasmàtic, l'exposició sistèmica generada per aquesta dosi va ser aproximadament 11 vegades la de l'exposició humana a la dosi humana recomanada (MRHD). La injecció subcutània d’1,0 mg/kg en rates femenines va donar lloc a un augment de la mort embrionària precoç, l’augment de pes visible i la disminució de la ingesta d’aliments.

2. A partir de les dues setmanes abans de l’aparellament fins al 17è dia de l’embaràs en rates femenines, es van administrar injeccions subcutànies de 0,1, 0,25 i 1,0 mg/kg/d de liraglutid. Segons els càlculs de l'AUC plasmàtic, l'exposició sistèmica generada per aquestes tres dosis va ser d'aproximadament 0,8, 3 i 11 vegades la de l'exposició humana en virtut de MRHD, respectivament. En el grup de dosis d’1 mg/kg/d, hi va haver un lleuger augment del nombre de morts embrionàries primerenques. A totes les dosis, es van observar anomalies fetal, variacions renals i vasculars, ossificació irregular del crani i un estat complet d’osificació excessiva. A una dosi d’1,0 mg/kg/d, es va observar el fetge tacat i la lleugera torna de costelles. La incidència de malformacions fetals que superen el mateix període i el control històric és: malformacions orofaringees i/o estenosi a la gola a una dosi de 01 mg/kg/d, i defectes umbilicals a dosis de 0,1 i 0,25 mg/kg/d.

El 6 al 18è dia de l’embaràs, els conills van ser injectats per via subcutània amb liraglutid a concentracions de 0,01, 0,025 i 0,05 mg/kg/d. Segons els càlculs de l'AUC plasmàtic, l'exposició sistèmica de conills embarassats va ser inferior a la dels humans durant la MRHD. A totes les dosis, el pes fetal va disminuir i la incidència global d’anormalitats fetal severes va augmentar de manera dependent de la dosi. A dosis de 0,01 mg/kg/d (ossos de ronyó, espatlla i melsa), majors o iguals a 0,01 mg/kg/d (ulls i avantpassats), 0,025mg/kg/d (cervell, cua i vèrtebres, grans vasos sanguinis i cor, cordó umbilical), superior o igual a 0,025 mg/kg/d (sternum) i cord 0,05 mg/kg/d (os parietal i grans vasos sanguinis), la incidència de malformacions va superar la dels controls contemporanis i històrics. L’osificació irregular i/o les anomalies esquelètiques es troben al crani i al collet, a les vèrtebres i a les costelles, a l’estèrnum, a la pelvis, al còccix i als ossos de l’espatlla i la melsa; També hi ha una lleugera variació esquelètica dependent de la dosi visible. Les anomalies viscerals es troben en vasos sanguinis, pulmons, fetge i esòfag. Tots els grups de tractament van mostrar dobles lòbuls o bifurcacions de la vesícula biliar, però no es va observar cap situació similar al grup de control.

4. Durant el període 6 de l’embaràs fins al deslletament o la terminació de la lactància el dia 24, les rates femenines es van injectar per via subcutània amb 0,1, 0,25 i 1,0 mg/kg/d de liraglutid. Segons els càlculs de l'AUC plasmàtic, l'exposició sistèmica va ser d'aproximadament 0,8, 3 i 11 vegades la de l'exposició humana durant el MRHD. El període de lliurament de la majoria dels animals del grup de tractament es va retardar lleugerament. El pes mitjà dels nounats del grup de tractament era inferior al del grup de control. Les rates femenines del grup de dosi d’1,0 mg/kg/d presentaven una pèrdua de sang i un comportament d’excitació durant el part. El pes corporal mitjà de les rates de descendència F2 del grup de tractament des del naixement fins al dia 14 després del naixement va ser inferior al del grup de control, però les diferències entre els grups no van assolir significació estadística.

Pols de liraglutideés un glucagó humà acilitzat sintetitzat artificialment com el pèptid-1 (GLP-1) amb una similitud de seqüència de més del 97% en comparació amb el GLP-1 natural. L’estructura molecular del liraglutide inclou les següents característiques principals: La 34a posició de la lisina de la molècula GLP-1 natural es substitueix per l’arginina, que no només conserva i allarga el temps d’unió entre els productes d’acilació i les proteïnes, sinó que també supera significativament el desavantatge de la degradació fàcil del GLP; Es va afegir una cadena lateral d’àcids grassos addicionals a la 26a lisina, cosa que ajuda a allargar la semivida dels productes d’acilació in vivo. Aquests canvis moleculars únics han fet que Delilaglutide mostri efectes destacats en el tractament clínic, especialment en la diabetis i la pèrdua de pes.

Els mètodes químics per sintetitzar el liraglutide inclouen principalment els passos següents:

1. Síntesi de fragments

En primer lloc, dividiu tot el liraglutid en diversos segments, que generalment es poden dividir en cinc segments: 1r a 4t aminoàcids, entre aminoàcids del dia del dia entre 11 i 16, aminoàcids, 17 al 24è aminoàcids i 25 a 31 aminoàcids. Cada fragment es sintetitza per separat, cosa que pot reduir la dificultat i el cost de la síntesi de pèptids i millorar l’eficiència de la síntesi.

Per a la síntesi de cada fragment, s’utilitzen generalment la síntesi de fase sòlida o els mètodes de síntesi en fase líquida. El mètode de síntesi en fase sòlida consisteix en connectar els grups carboxil d’aminoàcids a la resina, després afegir seqüencialment els aminoàcids a la resina en seqüència i, finalment, tallar els pèptids de la resina. El mètode de síntesi en fase líquida consisteix en dissoldre tots els aminoàcids en un dissolvent orgànic i després condensar-los en seqüència per formar fragments de pèptids.

2. Reacció d'acoblament

Realitzeu la reacció d'acoblament als 5 fragments de pèptids sintetitzats al pas 1 per formar un liraglutide complet. La reacció d'acoblament es pot dur a terme mitjançant agents d'acoblament químics o biològics i es pot seleccionar el mètode específic segons les necessitats reals.

En la reacció d’acoblament, és necessari connectar el grup amino de cada fragment amb el grup carboxil del següent fragment. Per aconseguir -ho, normalment és necessari utilitzar agents de condensació com DIC o BOP. Aquests agents de condensació poden promoure la reacció entre grups amino i carboxil, formant enllaços pèptids. En la reacció d’acoblament, també s’ha de prestar atenció al control de les condicions de reacció, com ara la temperatura, el valor de pH i el temps de reacció, per assegurar el progrés suau de la reacció.

3. Purificació i identificació

Cal purificar i identificar el liraglutide sintetitzat per assegurar la puresa i la qualitat del producte. La purificació es realitza generalment mitjançant mètodes com la cromatografia líquida d’alt rendiment (HPLC) o l’electroforesi, seguida de la identificació mitjançant espectrometria de masses, ressonància magnètica nuclear i altres mètodes. A través d’aquests mitjans, es pot assegurar que el pes i la seqüència moleculars del producte sintetitzat siguin coherents amb les expectatives i que no hi hagi impureses ni residus de subproductes.

4. Altres modificacions

A més dels passos anteriors, de vegades calen altres modificacions, com ara afegir o eliminar grups de protecció. Aquests passos també són essencials, ja que poden protegir els grups actius dels pèptids de ser destruïts o es produeixen reaccions laterals, millorant la qualitat i el rendiment de sintetitzarPols de liraglutide.

Els anteriors són els principals mètodes químics per sintetitzar el liraglutid, però, per descomptat, cal destacar alguns detalls i tècniques en funcionament pràctic. Per exemple, seleccionar el sistema de dissolvents adequat, controlar la temperatura i el pH i utilitzar catalitzadors adequats pot afectar l’eficiència de la síntesi i la qualitat del producte. Per tant, en funcionament pràctic, cal fer ajustaments i optimitzacions segons circumstàncies específiques.

El liraglutid (un agonista del receptor GLP-1 d’acció llarga) té un paper important en el tractament de la diabetis. Per garantir la seva controlabilitat de qualitat, cal establir mètodes analítics científics i rigorosos i realitzar una validació sistemàtica per assegurar la fiabilitat d’aquests mètodes. L’anàlisi següent es realitza de tres aspectes: ítems de validació, mètodes de validació i punts de control de claus.

Articles de verificació bàsics i requisits tècnics

Especificitat

Objectiu: demostrar que el mètode pot distingir el liraglutide de les impureses, els productes de degradació i els excipients.

Estratègia d’implementació:

Cromatografia: utilitzeu HPLC-UV o UPLC-MS. Mitjançant proves de degradació forçada (com ara alta temperatura, exposició a la llum, hidròlisi àcid-base), generen productes de degradació i verifiquen el grau de separació del pic principal i el pic d’impuresa (superior o igual a 1,5). Per exemple, en l’estudi del model APOE-/- del ratolí, després que s’oxidin el liraglutid, els productes de degradació (com els adductes d’àcid fòrmic) han de ser confirmats mitjançant anàlisi cromatogràfica per assegurar l’efecte de separació dels productes de degradació del pic principal.

Espectroscòpia: utilitzeu un detector PDA per comparar els espectres UV del pic principal i les impureses i confirmeu la puresa dels pics.

Control en blanc: verifiqueu l’absència de senyals falsos positius mitjançant mostres sense liraglutide (com ara solucions d’excipients).

 

Precisió

Objectiu: per assegurar -se que els resultats mesurats estiguin propers al valor real i la taxa de recuperació es controla dins del 98% - 102%.

Estratègia d’implementació:

Prova de recuperació d’addició estàndard: afegiu una quantitat coneguda de substància de referència a una mostra amb contingut de liraglutid conegut i mesura la taxa de recuperació. Per exemple, en l’anàlisi de la formulació, afegiu 0,5 mg/ml, 1,0 mg/ml i 1,5 mg/ml de liraglutid a la solució excipient en blanc, repetiu cada concentració 3 vegades i calculeu la taxa de recuperació mitjana.

Mètode de comparació: compareu -los amb mètodes clàssics (com la titulació) o mètodes verificats (com ara mètodes de farmacopea), i la desviació del resultat hauria de ser inferior o igual al 2%.

 

Precisió

Objectiu: Avaluar el grau de proximitat dels resultats de mesurament repetits, amb RSD inferior o igual al 2%.

Estratègia d’implementació:

Repetibilitat: Realitzeu 6 mesures consecutives de la mateixa mostra pel mateix analista, el mateix instrument i el mateix lot de mostres i calculeu la RSD.

Precisió intermèdia: calculeu la RSD determinant el mateix lot de mostres per diferents analistes, diferents instruments i dates diferents. Per exemple, en la determinació del contingut de liraglutids, la RSD de repetibilitat hauria de ser inferior o igual a l’1,5%, i la RSD de precisió intermèdia hauria de ser inferior o igual al 2,0%.

Reproductibilitat: verificació col·laborativa de diversos laboratoris (com ara mètodes estàndard de Pharmacopoeia), la RSD hauria de complir els principis d’orientació.

 

Límit de detecció i límit de quantificació

Objectiu: Determinar la concentració mínima que el mètode pot detectar i quantificar liraglutide.

Estratègia d’implementació:

Mètode de relació senyal-soroll: Determineu LOD amb una relació senyal-soroll 3: 1 i determineu LOQ amb una proporció de senyal / senyal de 10: 1. Per exemple, en el mètode HPLC-UV, el LOD de liraglutide pot ser tan baix com 0,01 ug/ml, i el LOQ és de 0,05 ug/ml.

Mètode de corba estàndard: calculeu LOD i LOQ mitjançant els senyals de resposta de substàncies estàndard de baixa concentració (com ara 0,1 ug/ml - 1 ug/ml).

 

Linealitat

Objectiu: demostrar que el senyal de resposta és proporcional a la concentració, amb R² superior o igual a 0,999.

Estratègia d’implementació:

Prova de concentració de gradient: prepareu 5-7 gradients de concentració (com ara 0,1 mg/ml - 2.0 mg/ml) de solucions estàndard, mesura l’àrea màxima o el valor de resposta i dibuixeu la corba estàndard.

Anàlisi residual: comproveu si els residus es distribueixen aleatòriament i no hi ha cap desviació sistemàtica.

 

Distància

Objectiu: determinar el rang de concentració aplicable del mètode, normalment el 120% del LOQ al límit superior de la linealitat.

Estratègia d’implementació:

Determinació del contingut: l’interval s’estableix al 80% - 120% de la quantitat etiquetada. Per exemple, el rang de determinació del contingut de la formulació de liraglutide hauria de ser de 0,4 mg/ml - 1.2 mg/ml. Control de la impuresa: segons la directriu ICH Q3D, estableix el rang límit d’impureses (per exemple, una impuresa única o igual al 0,5%, impuresa total inferior o igual al 2,0%).

Documents de validació i gestió de dades

01

Pla de validació i informe

Definiu clarament els ítems de validació, els mètodes, els estàndards d’acceptació i els procediments de manipulació anormals. Per exemple, si la RSD de precisió supera el límit, cal investigar les falles d’instruments o els errors operatius.

Graveu les dades originals (com ara els cromatogrames, les corbes estàndard, les taules de càlcul de la velocitat de recuperació) per assegurar la traçabilitat.

02

Desenvolupament del mètode d’indicació d’estabilitat

Per a les proves de degradació obligatòries, hauria de cobrir l’oxidació, l’exposició a la llum, la hidròlisi, etc., per simular les condicions reals d’emmagatzematge. Per exemple, el liraglutide situat a 60 graus durant 48 hores, la taxa de degradació ha de ser superior o igual al 10% per verificar la capacitat del mètode de detectar productes de degradació.

03

Compliment regulatori

Segueix ICH Q2 (R2), USP<1225>, i les directrius de GMP xineses per assegurar -se que els ítems de validació cobreixen indicadors bàsics com l’especificitat i la precisió.

Per a l'anàlisi de la impuresa elemental, hauria de complir amb ICH Q3D i USP<233>Requisits, controlant els límits d’elements d’1 classe com AS, CD i PB.

Etiquetes populars: Liraglutide Powder CAS 204656-20-2, proveïdors, fabricants, fàbrica, a l'engròs, compra, preu, a granel, a la venda